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分子生物学实验室常用仪器使用方法与保养
发布时间:2009-7-29  |  浏览次数:3255
 
分子生物学操作中会涉及一系列仪器,使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意事项,是使后继实验事半功倍的一个必要准备。
 
       一、冷冻离心机

       低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中,都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具。

       使用方法:

       1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。
       2.打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时平衡),关闭机盖。
       3.按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键,以便记忆输入的各项信息。
       4.按启动键,离心机将执行上述参数进行运作,到预定时间自动关机。
       5.待离心机完全停止转动后打开机盖,取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。

       注意事项:

       1.机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线。
       2.开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入。
       3.样品应预先平衡,使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。
       4.挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏,以免腐蚀机腔或造成事故。
       5.擦拭离心机腔时动作要轻,以免损坏机腔内温度感应器。
       6.每次操作完毕应作好使用情况记录,并定期对机器各项性能进行检修。
       7.离心过程中若发现异常现象,应立即关闭电源,报请有关技术人员检修。

       附:相对离心力与每分钟转速的换算

       离心机的转速,在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转速函数,亦为离心半径的函数,即转速相同时,离心半径越长,产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学的,近年来主张用相对离心力(RCF)来表示比较合理。现在国际资料中,已改用相对离心力来表示。

       二、PCR扩增仪

       目前各公司提供的PCR仪操作方法各有不同,按其操作说明进行操作。

       值得提出的是,在使用一定时期后,样品孔的实际温度与仪器显示温度有时会有较大差异,应当请厂商的技术支持人员校对仪器的各项性能。
 
       三、数字式酸度计

       【一】、准备工作

       1.仪器应平放在符合使用环境的工作台上,依视觉角度支起支架。
       2.pH值的定位测量法:
       (一)二点定位法(高精度测量方法)
       (1) 连接好电极线路,将参比电极及活化满24h以上清洁的PH电极移入第一标准缓冲液pH1中(例pH1=4.00),待仪器响应稳定后,调节定位旋钮至仪器显示为“0.00”;
       (2) 将电级系统从第1种标准液中取出,用去离子水冲洗干净后以滤纸吸干电级表面水份,移入第2种标准液(例pH2=9.18)中,仪器响应稳定后,调节斜率旋钮,使仪器显示为(△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18)此后斜率旋钮不可再动,除非更换电极系统;
       (3) 斜率调节完成后,重新调节定位旋钮,使仪器显示第2种标准液的实际pH值(9.18),至此2点定位结束;
       (4) 将电极从第2种标准液中取出冲洗、吸干后移入待测溶液中,仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。
       (二)一点定位法(粗略测量法)
       (1) 将温度补偿旋钮调至溶液温度值;
       (2) 向左将斜率补偿旋钮旋转至头;
       (3) 将电级系统移入标准液中(一点法仅用一种标准液,如pH=4.00时),调节定位旋钮使仪器显示“4.00”;
       (4) 取出电级冲洗吸干水分后移至待测溶液中,仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。
       (三)温度的测量
       1.将功能选择拨至温度档。
       2.将温度探头插入插孔,并将温度探头置于环境条件或溶液中,仪器响应稳定后仪器显示值即为环境条件或溶液温度值。
       (四)注意事项
       1.认真做好仪器使用前准备工作。
       2.仪器通电后或测量过程中出现显示不稳或乱跳现象,应切断电源进行检查,如电压、预热时间及电极系统等是否正常。
       3.使用不同电极应注意排除离子的干扰,选择好盐桥,必要时应使用离子强度固定剂。
       4.电极系统从第1种溶液取出移入第2种溶液之前,须用去离子水或双蒸水清洗干净,再用滤纸吸干表面水分,以免影响测定结果的准确性。
       5.仪器应存放于干燥、清洁无腐蚀的场所,每次测量结束后应关闭电源,退出电极及温度探头妥善保存。玻璃电极清洗后可浸于去离子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡),甘汞电极清洁后套上橡皮帽置于配套盒中保存,当甘汞电极内充液泄漏或不饱和及盐桥中断时,应及时补充饱和内充液。
       6.该类仪器均采用大规模集成电路,输入阻值较高,在对仪器内部进行任何零部件修理焊接时,应使用45W以下有良好地线的烙铁,无接地线烙铁应拨下电源插头焊接。

【二】、pH(酸碱度)测量

       1.将功能选择拨至“pH”档,调节定位旋扭,斜率补偿旋钮及温度补偿旋钮显示值应有相应变化。
       2.通过仪器温度档测定标准液及待测样品液温度(要求两种液体温度保持一致,以减少测定误差),并用温度补偿旋钮调节至溶液实际温度值。

       四、分光光度计

       不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同,从而形成特征性的吸收光谱。分光光度法不仅适应于可见光区,同时还可扩展至紫外光区及红外光区,因此给科研实验带来了极大方便。下面重点介绍分光光度计的使用及注意事项。

       使用规则:

       1.接通稳压器电源,待稳压器输出电压稳定至200V后打开光度计电源,仪器自动进入初始化。
       2.初始化约需时10 min,内容包括:①寻找零级光;②建立基线;③最后当显示器指示××nm时,,表明仪器完成初始化程序,可进入检测状态。
       3.按要求输入各项参数,选择相应比色杯(玻璃或石英),将空白管、标准管及待测管依次放入比色皿架内,关上比色池盖。
       4.以空白管自动调零。
       5.试样槽依次移至样品位置,待数据显示稳定后按“START/STOP”键,打印机自动打印所测数据,重复上述步骤,直到所有样品检测完毕。
       6.检测结束后应及时取出比色杯,并清洗干净放回原处,同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关,做好使用情况登记。

       注意事项:

       1.仪器初次使用或使用较长时间(一般为一年),需检查波长准确度,以确保检测结果的可靠性。
       2.由于长途运输或室内搬运可能造成光源位置偏移,导致亮电流漂移增大。此时对光源位置进行调整,直至达到有关技术指标为止。若经调整校正后波长准确度、暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未符合要求,则应停止使用,并及时通知有关技术人员检修。
       3.每次检测结束后应检查比色池内有否溶液溢出,若有溢出应随时用滤纸吸干,以免引起测量误差或影响仪器使用寿命。
       4.仪器每次使用完毕,应于灯室内放置数袋硅胶(或其它干燥剂),以免反射镜受潮霉变或沾污,影响仪器使用,同时盖好防尘罩。
       5.仪器室应通常保持洁净干燥,室温以5-35℃为宜,相对温度不得超过85%。有条件者应于室内配备空调机及除湿机,以确保仪器性能稳定。
       6.仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质,以免损坏仪器。
       7.仪器长时间不用时,应定时通电预热,每周1次,每次30min,以保证仪器处于良好使用状态。

       五、电泳仪

       电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。下面简单介绍其使用方法及注意事项。

       使用方法:

       1.首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接,注意极性不要接反。
       2.电泳仪电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小,根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
       3.接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止,设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行。
       4.工作完毕后,应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头。

       注意事项:

       1.电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电。
       2.仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
       3.由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
       4.在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命。
       5.某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏。
       6.使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故。

六、分析天平

       分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法,是获得可靠分析结果的保证。分析天平的种类很多,有普通分析天平、半自动/全自动加码电光投影阻尼分析天平及电子分析天平等。下面就电子分析天平的使用方法及注意事项做一介绍。

       操作方法:

       1.检查并调整天平至水平位置。
       2.事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器),按仪器要求通电预热至所需时间。
       3.预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节。待稳定标志显示后,可进行正式称量。
       4.称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,轻按一下去皮键,天平将自动校对零点,然后逐渐加入待称物质,直到所需重量为止。
       5.被称物质的重量是显示屏左下角出现“→”标志时,显示屏所显示的实际数值。
       6.称量结束应及时除去称量瓶(纸),关上侧门,切断电源,并做好使用情况登记。

       注意事项:

       1.天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁、干燥及较恒定的温度,同时应避免光线直接照射到天平上。
       2.称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。
       3.电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热,每周一次,每次预热2h,以确保仪器始终处于良好使用状态。
       4.天平箱内应放置吸潮剂(如硅胶),当吸潮剂吸水变色,应立即高温烘烤更换,以确保吸湿性能。
       5.挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量,防止腐蚀天平。
       6.通电前应按工作电源要求检查电压是否符合要求,若电源波动太大,应经交流稳压后再送接仪器。
       7.电源应用良好接线,以消除外界干扰,使用搅拌器时,务必使搅拌器外壳与仪器接地端相连。
       8.接通仪器电源,经10min预热后,可进行测量工作。

 

 
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